藥典不溶性微粒檢查方法介紹：

不溶性微粒檢查根據(jù)中國藥典2020版和USP的檢查規(guī)定，總共有三種方法：光阻法Light Obscuration、顯微計(jì)數(shù)法Microscopic和動態(tài)圖像法Flow Imaging。其中光阻法和顯微計(jì)數(shù)法規(guī)定的質(zhì)量放行的方法，而動態(tài)圖像法目前還是推薦研究的方法，特別是針對蛋白注射液。但是最新的USP1788章節(jié)也收錄了動態(tài)圖像法，代表動態(tài)圖像法將來會有更多的應(yīng)用場景。下面我們分布對三種方法的原理和優(yōu)缺點(diǎn)做一個(gè)簡單介紹：

藥典不溶性微粒檢查方法第一法：光阻法Light Obscuration

根據(jù)中國藥典2020版的描述，當(dāng)液體中的微粒通過一窄細(xì)檢查通道時(shí)，與液體流向垂直的入射光，由于被微粒阻擋而減弱，因此由傳感器輸出的信號降低，這種信號變化與微粒的截面積大小相關(guān)。

通過這些輸出信號的變化，得到顆粒大小和數(shù)量的結(jié)果。具體原理圖如下圖所示：

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因此光阻法原理的檢查優(yōu)勢，就是操作簡單，檢查快速，能滿足大多數(shù)產(chǎn)品的檢查需求。然而由于檢查原理的限制，也存在一定的缺點(diǎn)，第一就是無法檢查高濃度的樣品，因?yàn)槿菀壮霈F(xiàn)顆粒重疊或者互相阻擋的結(jié)果；第二無法識別氣泡和硅油等，會出現(xiàn)假性的結(jié)果；第三對于有顏色的樣品（特別是對于深顏色的樣品）和有粘度的樣品，容易出現(xiàn)假性結(jié)果。

藥典不溶性微粒檢查方法第二法：顯微計(jì)數(shù)法Microscopic

顯微計(jì)數(shù)法的操作原理是待測樣品過濾到濾膜上，在100倍的放大倍率下對濾膜上的顆粒進(jìn)行觀察，對比目鏡測微計(jì)中的參考圓，列舉濾膜上不同尺寸范圍內(nèi)粒子的數(shù)量。

因此，跟光阻法相比，顯微計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)也很明確，第一就是不僅可以看到顆粒的大小，還能觀察到顆粒的形貌；第二就是反映體系真實(shí)的不溶性微粒結(jié)果，避免氣泡、硅油、樣品顏色和粘度的影響。當(dāng)然缺點(diǎn)很明顯，就是需要一個(gè)制備樣品的過程，需要先把樣品過濾到濾膜上面，然后在進(jìn)行檢查。雖然我們胤煌YinHuang自主研發(fā)的設(shè)備已經(jīng)集自動制樣和自動于一體，但是跟光阻法相比，它還是操作比較復(fù)雜。

藥典不溶性微粒檢查方法第三法：動態(tài)圖像法Flow Imaging

動態(tài)圖像法，簡單的講，你可以把它想成是光阻法和顯微計(jì)數(shù)法的結(jié)合，讓樣品流動起來，然后不斷的進(jìn)行拍照和成像。從而得到顆粒大小、數(shù)量和形貌的分布。

所以，動態(tài)圖像法的優(yōu)點(diǎn)是一次測量，同時(shí)得到顆粒大小、數(shù)量和形貌的數(shù)據(jù)，因此像氣泡、硅油、蛋白聚集等，對于工藝的研究和開發(fā)有著非常大的幫助。那為什么這么好的方法卻不是質(zhì)量放行的方法呢，主要是以下缺點(diǎn)：第一就是因?yàn)檩敵龅男畔⑾鄬^多，所以檢查效率跟光阻法相比還是有一定的差距，第二受限于原理的限制，檢查的樣品量相對較少，統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義上有待研究；第三作為一種新興的方法，在實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和方法的積累上還有很長的路要走。

因此，對于不溶性微粒檢查來講，跟顆粒檢查的方法類似，沒有任何一種方法能cover所有的檢查，如果想要真實(shí)的了解樣品不溶性微粒的結(jié)果，需要多種方法的相互配合。